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臨床生化檢驗中常見問題解析

2015-10-11 1977
一、導致生化項目校準結果不良的因素

1、儀器方面
(1)光源燈老化導致儀器發光不穩定造成酶類試驗項目重復性不良;
(2)孵育系統臟污產生的隨機誤差;
(3)比色杯臟污、劃痕引起外來干擾;
(4)試劑針、樣品針及其密封墊老化造成加樣不準引起校準結果不良;
(5)清洗機構滴水或堵塞造成交叉污染引起結果不良。

2、試劑方面
(1)試劑劣化引起試劑空白吸光度值變化而造成試劑反應效能不良;
(2 校準品失效引起校準結果靈敏度喪失—標示值和實際值之間的吸光度存在差距。

3、參數方面
(1)參數設置不合理或者錯誤。

二、生化項目測試結果不良的具體情況分析

當出現測試結果不良的情況時,首先要分析是所有項目結果不良還是個別項目結果不良;結果不良的項目是否存在規律性;是采用速率法還是終點法分析的項目;是采用單試劑的還是雙試劑的項目。然后再做針對性的進一步分析:

1、由光路因素造成的結果不良?,F象:速率法酶類項目(主波長340nm)結果混亂。原因分析:(1)燈泡老化;(2)反應槽臟污;(3)水質太差;(4)比色杯臟污;(5)比色杯破損;(6)光窗脫落滲水。

2、由加樣系統故障造成的結果不良?,F象:結果偏低或高,或為零,或為負值。原因分析:(1)樣品針(試劑針)臟污堵塞;(2)水平相對位置有偏移導致加樣不準;(3)注射器密封性不良有氣泡;(4)管路漏氣;(5)脫氣部分不良;(6)樣品針高度不合適會引起SAMPLESH0T的報警;(7)樣品針高度不夠,采集不到樣品,引起項目結果為零或負值。

3、由試劑因素造成的結果不良。
(1)試劑變質失效將會使反應曲線不良;(2)試劑間存在交叉污染也會造成測試結果不良;(3)此外,還要檢查在更換試劑后,測光點、反應方向、上下界線等參數的設置是否正確。

4、由攪拌棒造成的結果不良。

(1)如果單試劑的項目結果不良,攪拌棒1可能有問題;(2)如果雙試劑的項目結果不良,攪拌棒1和2都可能有問題;(3)當攪拌棒位置偏移或旋轉不良,導致反應不充分,也會造成結果不良。

5、由清洗機構造成的結果不良。

(1)管路真空不良致使廢液吸不干凈造成結果不良;(2)管路堵塞后造成管路滴水、溢水也會導致結果混亂。

三、全自動生化儀雙試劑項目中出現R1、R2液不能匹配的原因分析

雙試劑項目一段時間做下來后,試劑盒中就會出現R1與R2不能匹配情況,原因是加試劑時試劑針都有附加余量,而且隨加的試劑量不同,附加余量也不同;以日立儀器為例,在日立生化儀(如7060)操作手冊上有個關于“為防止試劑被稀釋,在每次吸取試劑時再吸取一定的余量加在設定量上”的表格如下:
試劑設定量(μl) 50 100 150 200 250 300 350
附加余量(μl) 13 16 19 23 26 29 32
舉個例子,做ALT項目,反應試劑參數,R2為50μl,R1為200μl,R2:R1=1:4
日立7060生化儀實際做時R2要吸掉63μl,R1吸掉223μl,R2:R1=1:3.54,這個吸樣比例與實際需要的比例(試劑盒標示的比例)失衡!時間一久,就會造成R2 已經用完而R1還剩余很多的情況。

四、生化檢測過程中引起交叉污染的原因分類

交叉污染是生化儀使用中常見的現象,簡單理解為在A項目測定中所使用的試劑、樣本、反應產物、清洗劑等對B項目的測定產生了不良影響的現象,A項目和B項目不一定是相鄰項目。
交叉污染具體類型可分為:(1)樣本針攜帶污染;(2)試劑針攜帶污染;(3)攪拌棒攜帶污染;(4)清洗系統攜帶污染;(5)比色杯污染。

五、特別針對CKMB/CK升高或倒置的原因簡析

在臨床實驗中偶爾會遇到個別臨床標本其CKMB的檢測結果與CK的結果不相符,CK的結果在正常范圍,而CKMB的檢測結果卻明顯偏高,甚至出現CKMB的結果大于CK的現象,分析原因如下:

1、試劑因素,主要表現為試劑污染或使用已過有效期的試劑。

2、儀器因素,市面上CKMB的校準品或質控品較少見,而且其價格也較其他酶類校準品高得多。因此,一般醫院都未使用CKMB校準品和質控品,而是采用廠家試劑盒使用說明書提供的理論因素,在理論因素設置時,不同儀器略有差異。

3、方法學因素,肌酸激酶CK是由B、M兩種不同亞基組成的二聚體,所以CK有三種同工酶即CKMM、CKMB、CKBB。CKBB主要存在于腦組織、胃腸道及子宮平滑肌中,腦組織中幾乎全為CKBB,CKMB主要存在于心肌組織中,CKMM主要存在于骨骼肌組織中。在正常人血清中幾乎無CKBB或極微量。理論上CKMB的活性是不可能大于CK活性的。目前常用的檢測CKMB的方法是免疫抑制法,出現CKMB>CK的情況就是可能由這種方法的檢測原理造成的。在人體中正常情況下CKBB很少,可忽略,而免疫抑制法就是建立在忽略CKBB的基礎上的。即用抗CKM單體的抗體將M亞基完全抑制,所以CKMM會失去活性,而CKMB活性會失去一半,這樣測出的活性實際就是CKMB的一半,所以CKMB的活性應該為測定的2倍。但如果存在CKBB就會使結果偏高,即測定的CKMB活性= CKMB+2CKBB。如果CKBB>CKMM,由于結果要乘2,也就是說2CKBB+CKMB>CKBB+CKMB+CKMM,即測得的CKMB活性>CK活性。

4、溶血因素,因紅細胞內含有大量的腺苷酸激酶(AK)從而催化ADP反應生成ATP而引起NADPH的吸光度的改變,使CK和CKMB測定結果假性偏高。CKMB是CK-B×2,假性偏高較CKMM更明顯,同時CKMB參考范圍較小,可能出現CKMB大于CK或CK結果在正常范圍內,而CKMB結果卻明顯偏高。

5、隨機誤差,如吸到小氣泡等。

以上是工作當中碰到的一些常見生化檢驗中的問題以及一些認識和看法,如有不妥之處敬請批評指正。


【來源】中國體外診斷網

【整理】TACRO

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